研究生物顯微鏡氨基酸順序如何重建原來的多肽
后來Sanger通過研究指出,實際上在胰島素分子中有二條多從鏈。他能用還原法拆離二硫鍵,分離完整的肽鏈。下一個任務是測定兩條已分離的肽鏈的氨基酸順序。面對這一點,大概Sanger想到一句古老的諺語:“千里征途始于足下。 用DNFB末端基團分析技術鑒定二條多肽鏈的N末端氨基酸。這兩條多肚鏈被命名為A鏈和B鏈。Sanger發現,A鏈的N末端殘基是甘氨酸,而B鏈的N末端氨基酸是苯丙氨酸,v肽酶能專一性地催化鄰近自由狡基的肽鍵的水解,Sanger利用這樣一個事實鑒定出C末端殘基。A和B鏈的C末端氛基酸分別被證明是天冬酰胺和丙氨酸。 研究發現A鏈含有四個半胱氨酸殘基,R鏈含有兩個半胱氨酸殘基。 根據所有這些資料,對胰島素提出如下的初步結構:A,B鏈的中間順序的測定是通過用酸、堿或酶部分水解,隨后分離產生的肽碎片。Sanger把水解A鏈和B鏈產生的肽碎片做N末端和C末端氨基酸分析,然后將這些碎片進一步降解,直到這些小肽中每一個的氨基酸順序都顯出交叉重受的殘基順序,以便據此重建原來的多肽。
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