I關鍵材料及方法(Subject and Methods）

本實驗之玻璃纖維使用直接融熔法，不需要先制成玻璃球，直接把各種原料

按組成比例同時投入窯中熔融，熔態玻璃經澄清后通過窯中的數十塊白金拉絲板的小孔流出而獲得玻璃絲。

 

 ※細胞培養 

 

一.基材前處理 在培養神經細胞之前，基材必須先經過一些前處理步驟：

（1）將基材以UV燈照射約一天。 

（2）將滅菌好的基材置入24孔洞培養盤中。 

（3）加入70%酒精浸泡約一天，并同時用UV燈照射，以達到滅菌的效果。再用 PBS緩沖溶液沖洗浸泡，將酒精完全除去。

 

 二.初代培養步驟 主要在于取得小腦顆粒狀細胞（cerebellum granule cells），并培養在不同表面型態的膜材上。 

小腦顆粒狀細胞是來自小腦皮質，整個過程如下: 

（1）取得小腦皮質 先將手術器械以高壓蒸汽（autoclave）滅菌，將出生第七天大的Wistar rat，

用以過量的麻醉劑麻醉使致死（0.1ml），再以酒精擦拭老鼠體表，以避免 污染。 要取腦部時，將頭和軀干分離，

左手以鑷子固定約在嘴的部位，剪開頭皮及 頭殼，再用小鑷將頭殼打開，此時看見完整腦部，將大腦、喬腦、延腦、

小腦等 分離，并用鑷子取出小腦，將腦部置于Kreb's soln.中，再將小腦髓質與皮質 分離，仔細清除掉皮質外的腦膜及微血管。 

 

（2）純化細胞 將小腦皮質置于裝有Kreb's soln.的燒杯中，以彎頭小剪將皮質組織剪 碎至約1mm 3 的大小，

吸取小腦皮層碎塊，置于50 ml的離心管中，加入10ml的 Kreb's soln.及1 ml的胰蛋白酶溶液（3.5％），

置于37 0 C水浴30分鐘以解碎 組織。 再加入胰蛋白酶抑制劑溶液（3.5％）1ml以及DNAse soln. 0.1ml和10ml 

的Kreb's soln.，放入37 0 C的水浴30分鐘以抑制胰蛋白對細胞的傷害。 將 離心管取出后離心，350g、5分鐘，以移除上層液體。 

加約10 ml的Kreb's soln.， 然后利用玻璃滴管將細胞用力沖散，再以350g離心5分鐘，移除上層液體，

加 入BME medium 10ml，均勻混合后，作細胞計數。 

 

（3）接種細胞 將細胞稀釋至的濃度后，接種于已裝在有待測基材的24孔洞培養盤上，使 細胞的密度后達到5×10 5 cells/cm 2 ，

每個材料以六重復的方式來作測試，在1824小時后換含有Ara C的BME medium，以 ??抑制會分生的神經膠原細胞生長所 造成的干擾

 

※ MTT評估神經細胞之活性 MTT test是利用活細胞中的粒線體可以將黃色的MTT代謝為藍色的 formazan晶體，可以用來測量細胞的貼附及生長情形，其步驟如下： 1.將培養盤中的medium抽出并以PBS溶液沖洗兩次，將0.1g的MTT粉末溶 于50ml的PBS溶液中，過濾滅菌，然后在每一個well中加入0.1ml的MTT 溶液，置于incubator中作用3小時，整個過程需避光。 2.在每個well中加入0.2ml DMSO溶液，在搖蕩器(shaker)上搖15分鐘，使其 均勻。 將細胞內的MTT產物formazan溶出。 3.取0.1ml溶液置于96well的培養盤中，以ELISA Reader讀取波長570 nm的 吸光值。